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PCR試劑盒（教學用）
常規PCR發展到如今已經是非常成熟，對于大多數的科研人員來說，買TAQ酶和dNTP就可以，而如果為省事，可以直接買PCR MasterMix。而本試劑盒從PCR的原理來讓學生學會PCR。本試劑盒帶有模板和引物，可以產生500bp的單一條帶。
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 50次 | 500次 | 儲存條件 |
Taq Polymerase(5U/ul) | 50ul | 500ul | -20℃ |
10×PCR Buffer | 1ml | 5ml | -20℃ |
MgCl2(25mM) | 1ml | 5ml | -20℃ |
模板（1ng/ul） | 100ul | 1ml | -20℃ |
上游引物(10mM) | 100ul | 1ml | -20℃ |
下游引物(10mM) | 100ul | 1ml | -20℃ |
ddH2O（PCR用） | 2ml | 25ml | -20℃ |
6×DNA Lodding Buffer | 1ml | 1ml | -20℃ |
500bp對照（50ng/ul） | 100ul | 1ml | -20℃ |
說明書 | 1份 | 1份 | RT |
保存說明：10×PCR Buffer、MgCl2(25mM)、ddH2O（PCR用）在2-8℃保存一個月對實驗無影響，500bp對照、模板和引物在2-8℃保存一周對實驗無影響。微量試劑打蓋前請離心。
自備試劑：瓊脂糖，電泳緩沖液，核酸染料（如EB，goldveiw等）
操作步驟：
按照下面的量加入試劑：可一次配50ul，或者一次配更多的量，如500ul，混勻再分成50ul一管。一般Taq Polymerasezui后加入。
加入試劑 | 加入量總50ul | 加入量500ul |
ddH2O（PCR用） | 37ul | 370ul |
10×PCR Buffer | 5ul | 50ul |
MgCl2(25mM) | 4ul | 40ul |
模板（1ng/ul） | 2ul | 20ul |
上游引物(10mM) | 2ul | 20ul |
下游引物(10mM) | 2ul | 20ul |
Taq Polymerase(5U/ul) | 1ul | 10ul |
總體積 | 50ul | 500ul |
混勻。
按照下面的條件設置反應
溫度 | 時間 | 循環次數 |
94℃預變性 | 3min | 1 cycles |
94℃變性 | 30sec | 30 cycles |
54℃退火 | 30sec | |
72℃延伸 | 500-2000bp/1min | |
72℃終延伸 | 5min | 1 cycles |
反應完降溫到25℃ | ||
反應完后，取5ul產物，加入1ul 6×DNA Lodding Buffer 混勻電泳檢測。可同時在兩測跑一個500bp的對照。（1.5%的膠可以得到理想的結果）
- 上一篇：50×Denhardt溶液
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